一、什么是正相高效液相色譜儀（NP-HPLC）？

正相高效液相色譜（Normal Phase High Performance Liquid Chromat，簡稱NP-HPLC）是一種基于極性差異進(jìn)行分離的分析技術(shù)。其固定相為極性材料（如硅膠、氨基鍵合相等），流動相為非極性或弱極性有機(jī)溶劑（如正己烷、氯仿等）。樣品在分離過程中，極性強(qiáng)的組分保留時間較長，極性弱的組分先被洗脫，從而實(shí)現(xiàn)分離分析。

二、NP-HPLC的主要組成

一套完整的正相高效液相色譜系統(tǒng)，通常包含以下核心模塊，與圖片中各產(chǎn)品系列高度對應(yīng)：

高壓輸液系統(tǒng)：如EClassical系列采用的“高精度低壓四元泵”、“高壓恒流泵”或“雙泵聯(lián)用技術(shù)”，負(fù)責(zé)輸送穩(wěn)定、低脈動的流動相。

進(jìn)樣系統(tǒng)：高效自動進(jìn)樣器，如描述中提到的“極速進(jìn)樣1秒內(nèi)”、“自動進(jìn)樣技術(shù)”，確保進(jìn)樣精準(zhǔn)、快速。

色譜柱與柱溫箱：極性色譜柱（如硅膠柱）是分離核心，配合智能溫控柱箱（如支持“6柱溫控”）保證分離重現(xiàn)性。

檢測系統(tǒng)：可與紫外/PDA檢測器、熒光檢測器等多檢測器靈活聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)高靈敏度（如“ng級”）與全光譜掃描。

餾分收集與純化系統(tǒng)（制備型）：當(dāng)用于純化時，需搭配如F3310餾分收集器或S3320一體機(jī)，實(shí)現(xiàn)全自動、可視化的精準(zhǔn)收集。

數(shù)據(jù)工作站：所有系統(tǒng)均支持合規(guī)工作站，滿足GMP/GLP和數(shù)據(jù)可靠性要求。

表1.正相高效液相色譜儀（NP-HPLC）核心組成與功能

三、NP-HPLC的主要特點(diǎn)

適用于極性化合物分析：特別適合分離極性差異明顯的樣品，如脂類、有機(jī)酸、手性藥物、部分農(nóng)藥殘留等。這使其成為氨基酸分析系統(tǒng)（如Elite-AAK/AAP）、黃曲霉毒素分析系統(tǒng)等專用方案的核心技術(shù)之一。

流動相選擇靈活：可通過調(diào)節(jié)非極性溶劑的種類和比例優(yōu)化分離，與Agress 1100+HPLC系統(tǒng)提到的“支持正反相及GPC溶劑”的特性相符。

重現(xiàn)性與穩(wěn)定性好：在穩(wěn)定條件下保留時間重復(fù)性高。EClassical系列強(qiáng)調(diào)的“精準(zhǔn)、高效、穩(wěn)定”及“RSD≤0.25%”的優(yōu)異穩(wěn)定性正是關(guān)鍵優(yōu)勢。

易于向制備規(guī)模擴(kuò)展：分析條件可方便地放大至半制備或工業(yè)制備系統(tǒng)，如3140AP、EClassical3500/3700及Elite IPC-50系列，實(shí)現(xiàn)從分析到克級、十克級純化的無縫銜接。

表2.NP-HPLC與反相HPLC核心區(qū)別對比

四、操作注意事項(xiàng)

溶劑純度與干燥度：必須使用色譜純且充分干燥的非極性溶劑，水分會嚴(yán)重影響硅膠柱效和分離重現(xiàn)性。

系統(tǒng)平衡至關(guān)重要：更換流動相后需用新流動相充分沖洗并平衡色譜柱，通常需要較長時間（10-20個柱體積）以確?；€穩(wěn)定。

樣品溶劑匹配：樣品應(yīng)盡量溶解在與流動相極性相近的溶劑中，防止在柱頭沉淀造成柱壓升高和峰形變差。

壓力監(jiān)控與維護(hù)：密切關(guān)注系統(tǒng)壓力。采用如EClassical3100的“專利消二烷基硅油潤濕”等技術(shù)可提升系統(tǒng)耐用性。定期沖洗和維護(hù)系統(tǒng)是保障長期穩(wěn)定的關(guān)鍵。

色譜柱保存：使用后需用適當(dāng)干燥溶劑（如正己烷）徹底沖洗，密封保存于干燥環(huán)境中。

表3.NP-HPLC操作注意事項(xiàng)與解決方案

五、正相HPLC在現(xiàn)代分析實(shí)驗(yàn)室中的價值

正相高效液相色譜儀以其在極性化合物和異構(gòu)體分離方面的獨(dú)特優(yōu)勢，在制藥研發(fā)（如手性藥物分離）、食品與農(nóng)產(chǎn)品安全檢測（如黃曲霉毒素、氨基甲酸酯、三聚氰胺分析系統(tǒng)）、生物化學(xué)（如氨基酸分析）及化工質(zhì)檢等領(lǐng)域扮演著的角色。

無論是追求極致分析性能的超高效液相色譜儀（如EClassical3200L），還是兼顧合規(guī)與穩(wěn)定的高效液相色譜儀（如EClassical3100、Agress 1100），或是面向純化需求的半制備/制備系統(tǒng)，現(xiàn)代正相HPLC技術(shù)都已發(fā)展成為精準(zhǔn)、高效、自動化程度高的整體解決方案。通過靈活配置多檢測器、搭配智能餾分收集器，并依托合規(guī)數(shù)據(jù)工作站，正相HPLC持續(xù)為科研與質(zhì)量控制提供著強(qiáng)大而可靠的技術(shù)支撐。

表4.NP-HPLC主要應(yīng)用領(lǐng)域與對應(yīng)專用系統(tǒng)

常見問題(FAQ)

問1. 正相與反相HPLC有什么區(qū)別？

這是選擇液相色譜方法的核心問題。圖片中的Agress 1100+HPLC系統(tǒng)明確提到“支持正反相及GPC溶劑”，體現(xiàn)了儀器的通用性。兩者主要區(qū)別如下：

固定相極性：正相為極性固定相（如硅膠、氨基、氰基柱）；反相為非極性固定相（如C18、C8柱）。

流動相極性：正相使用非極性或弱極性有機(jī)溶劑（正己烷、氯仿等）；反相使用極性溶劑（水、甲醇、乙腈等）。

洗脫順序：正相中極性強(qiáng)的組分后流出；反相中極性強(qiáng)的組分先流出。

應(yīng)用側(cè)重：正相擅長分離極性化合物、異構(gòu)體、脂溶性物質(zhì)（如某些維生素、農(nóng)藥）；反相應(yīng)用更廣，適合大多數(shù)有機(jī)化合物，尤其是水溶性或中等極性物質(zhì)。

問2. 為何正相HPLC分析時峰形拖尾或保留時間不穩(wěn)定？

可能原因包括：

溶劑含水量高：這是常見原因，務(wù)必確保溶劑干燥。

樣品過載或溶劑不匹配：樣品量太大或溶解溶劑極性過強(qiáng)。

色譜柱失活或污染：硅膠柱活性位點(diǎn)被污染或失活。

環(huán)境溫濕度影響：實(shí)驗(yàn)室濕度未控制好。

解決方案：使用干燥溶劑重新平衡系統(tǒng)；減少進(jìn)樣量；對色譜柱進(jìn)行再生（按柱說明書操作）；在控溫控濕環(huán)境下運(yùn)行。

問3. 正相色譜方法如何向制備純化轉(zhuǎn)移？

圖片中的制備型與半制備系統(tǒng)為此提供了完美答案：

直接放大：在分析型NP-HPLC（如EClassical3200）上優(yōu)化好分離條件后，可按比例放大至半制備系統(tǒng)（如3140AP，流速0.1-40 mL/min）。

系統(tǒng)升級：為提升純化效率，可選擇EClassical3500/3700等具備“智能多體積梯度混合器與大流量沖洗功能”的系統(tǒng)。

工業(yè)化生產(chǎn)：對于大規(guī)模純化需求，Elite IPC-50系列工業(yè)制備色譜系統(tǒng)采用“動態(tài)軸向壓縮柱+雙高壓泵”，是實(shí)現(xiàn)高效、穩(wěn)定工業(yè)化生產(chǎn)的理想選擇。