高效液相色譜的壓力問題，咱們實驗室的人聚在一起，十次有八次在聊這個。上周隔壁組的老張，因為壓力突然沖高，一根用了不到三個月的新柱子就報廢了，心疼得直拍大腿。其實吧，壓力這玩意兒就像儀器的心跳，跳得太快太慢，都說明身體可能出了狀況。

別上來就問范圍，先看你開的是什么“車”

新手愛問：“老師，正常壓力應該是多少？”這問題真沒法給個死數(shù)字。這么說吧：

如果你用的是咱們常見的普通液相色譜，它們的設計壓力一般在400 bar（約6000 psi）以內(nèi)。日常做做常規(guī)樣品，壓力在100到300 bar之間波動，都屬于它的“舒適區(qū)”。這時候儀器運行平穩(wěn)，數(shù)據(jù)也漂亮。

但你要是用的是近幾年流行的超高效液相色譜，那完全是另一回事了。它用的是更細的填料，管路也更細，就是為了更高的效率。它的“工作區(qū)間”動輒就在600到1000 bar以上，壓力低了反而可能說明流速沒上去或者系統(tǒng)有異常。這就好比跑車和家用轎車，發(fā)動機的轉速能一樣嗎？

所以，看壓力健不健康，首先得看你家儀器銘牌上寫的大耐受壓力是多少。業(yè)內(nèi)有個不成文的規(guī)矩：讓日常工作壓力保持在大值的70%到80%以下，是穩(wěn)妥、養(yǎng)機器的做法。別總把儀器逼到極限。

表1.不同類型液相色譜儀壓力參數(shù)參考

相關產(chǎn)品推薦：1、高效液相色譜儀  2、超高效液相色譜儀  3、制備液相色譜儀  4、專用液相色譜儀

壓力不穩(wěn)？先自查這幾個“習慣動作”

壓力出毛病，八成是日常操作里的細節(jié)沒到位。根據(jù)我們實驗室多年踩坑總結的經(jīng)驗，問題往往出在以下幾點：

流動相，這是頭號嫌疑犯。 很多新人圖省事，用自來水或純水機里隔夜的水配緩沖鹽。里面滋生的微生物和雜質，很容易堵住柱子入口的篩板，壓力就會像爬樓梯一樣慢慢升高。必須用新鮮制備的純凈水或水相，好現(xiàn)配現(xiàn)用。有機相記得用色譜級的，別心疼那點錢。

還有，實驗記錄本上記好：換流動相時，尤其從高比例有機相換到高比例水相時，一定要做過渡沖洗。不然鹽析出來，堵在泵里或柱子里，那可就是大麻煩。

樣品，必須“干干凈凈”。 老張那根廢掉的柱子，后來拆開看，進口端都黑了一層。他們做的中藥提取物，雖然離心了，但沒過濾。樣品里的細小顆粒和強吸附雜質，就是色譜柱的“慢性毒藥”。上機前，務必過0.22或0.45微米的濾膜，這是保護柱子經(jīng)濟有效的一招。加一個保護柱，相當于給主柱上了個保險，雖然多花點小錢，但絕對值。

系統(tǒng)，有沒有“內(nèi)傷”。 壓力如果像心電圖一樣上下跳，很可能是泵的單向閥臟了，或者里面進了微小氣泡?？梢栽囋囉卯惐汲暻逑磫蜗蜷y。如果是壓力緩慢下降，大概率是哪里漏液了。重點檢查泵頭密封圈、進樣針座和柱子兩頭的接頭，這些地方是泄漏的高發(fā)區(qū)。平時做完實驗，多用純甲醇或乙腈低流速沖一沖系統(tǒng)，保持管路暢通。

表2.影響液相色譜儀壓力的關鍵因素及應對措施

當壓力真的報警了，別慌，按這個順序排查

第一步：卸下色譜柱，換上兩通。 用純甲醇以1.0 mL/min的流速沖系統(tǒng)，看壓力是多少。如果此時壓力依然很高（比如超過100 bar），那問題肯定在儀器流路上（泵、混合器、檢測器流通池等）。

第二步：如果換上兩通壓力正常，再接上柱子試試。 壓力高了，就是柱子或保護柱的問題。先換個新的保護柱，如果壓力恢復正常，萬事大吉；如果還高，那可能就是主柱堵了，需要嘗試反向沖洗或聯(lián)系柱子廠商。

第三步：檢查簡單的。 流動相瓶里的濾頭是不是太久沒洗，被堵住了？瓶子里溶劑是不是快用光了，泵抽進了空氣？

表3.液相色譜儀壓力異常排查步驟

說到底，高效液相色譜是個精細活兒，壓力是它誠實的“語言”。每天開機后，花一分鐘看看基線壓力穩(wěn)不穩(wěn)定，跟昨天的記錄對比一下。這個小小的習慣，能幫你提前發(fā)現(xiàn)很多潛在問題，避免像老張那樣“車毀柱亡”的悲劇。儀器維護好了，它回報給你的是穩(wěn)定、可靠的數(shù)據(jù)。這才是咱們做實驗的人，大的底氣。

常見問題(FAQ)

問1：老師，我剛換了根新柱子，為什么壓力比舊柱子高了不少？這正常嗎？

答：這多半是正常的，先別緊張。新柱子里的填料裝填得非常緊密，流動相通過時的阻力自然會大一些，壓力高點很正常。你可以先走一段時間，讓流動相充分浸潤和平衡新柱子，壓力通常會穩(wěn)定到一個值。如果壓力高得離譜（比如接近系統(tǒng)上限），或者持續(xù)飆升，那就要檢查一下：1）你用的流動相和新柱子是不是兼容（比如正相柱誤用了反相條件）；2）你樣品溶劑的強度是不是太強，導致樣品在柱頭析出。新柱子就像新鞋，需要一段“磨合期”。

問2：我做梯度洗脫的時候，壓力為什么會跟著變？有時高有時低的。

答：這是梯度洗脫的典型特征，壓力曲線像條拋物線是正常的。因為有機相（比如乙腈、甲醇）和水相的粘度不同，兩者混合比例變化時，混合液的粘度也會變。通常在中間某個比例時（比如水和乙腈各一半左右），粘度大，壓力就會出現(xiàn)一個峰值。你只要確保這個壓力峰值不超過儀器的安全上限就行。如果發(fā)現(xiàn)梯度過程中壓力劇烈跳動或出現(xiàn)毛刺，那可能是混合器里有氣泡或者混合不均勻，需要檢查脫氣情況和泵的混合效率。

問3：壓力顯示正常，但色譜圖的分辨率就是不好，峰又寬又拖尾，這和壓力有關系嗎？

答：壓力正常但效果不好，這說明流動相系統(tǒng)是通暢的，但問題可能出在“化學層面”上。這時候，壓力這個“健康指標”雖然合格，但“治病”得找其他原因。你可以重點排查：1）柱效是否下降：柱子用了很久，填料塌陷或污染，會導致峰變寬，可以測一下柱效；2）流動相pH和添加劑是否合適：對于酸性或堿性化合物，沒調(diào)節(jié)好pH或沒用對離子對試劑，就容易拖尾；3）樣品與柱子是否匹配：樣品可能在當前條件下保留太弱或太強。壓力好比汽車的油壓表，油壓正常不代表發(fā)動機功率就一定足，也可能是火花塞老了或者油品不好。

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