做實驗的同行們，估計都遇到過液相色譜壓力“鬧脾氣”的時候。壓力曲線像過山車一樣上躥下跳，數(shù)據(jù)沒法看，實驗進度卡殼，心里那個急啊。今天咱們就來聊聊這個常見問題，從現(xiàn)象到原因，再到解決辦法，一步步幫你理順。

一、先看看壓力不穩(wěn)長什么樣

壓力不穩(wěn)通常分兩種：一種是壓力有規(guī)律地周期性波動，另一種是壓力毫無規(guī)律地亂跳。前者往往指向某個系統(tǒng)部件的問題，后者可能是多因素疊加。

直觀的就是看實時壓力曲線——正常的應(yīng)該是一條平穩(wěn)的直線，波動范圍通常不超過設(shè)定壓力的1%-2%。如果曲線開始“跳舞”，那就要開始排查了。

相關(guān)產(chǎn)品推薦：1、高效液相色譜儀  2、超高效液相色譜儀  3、制備液相色譜儀  4、專用液相色譜儀

二、常見原因逐個數(shù)

1. 流動相里的“小氣泡”

這是常見的原因之一。流動相脫氣不徹底，或者溶劑瓶里的溶劑快用完了，都容易引入氣泡。

怎么判斷？觀察壓力波動往往沒有規(guī)律，同時伴隨著基線噪聲增大。如果是purge閥或在線脫氣機工作異常導(dǎo)致脫氣不足，壓力波動可能更明顯。

2. 泵的問題

單泵或二元泵的某一個泵頭出問題，都會導(dǎo)致壓力不穩(wěn)。

單向閥故障：閥球被污染卡住，或者閥座磨損。這時壓力往往會有規(guī)律的周期性波動，頻率與泵的沖程一致。

柱塞桿或密封圈磨損：可能導(dǎo)致滲漏，壓力上不去且波動。

比例閥或混合器問題（對二元泵而言）：會導(dǎo)致混合不均勻，壓力波動。

3. 進樣器漏液

進樣針或針座磨損、轉(zhuǎn)子密封圈損壞，都會導(dǎo)致微量滲漏。這種波動往往在進樣時或進樣后更明顯。

4. 色譜柱“堵了”或“塌了”

柱頭篩板堵塞、柱床內(nèi)有空隙或塌陷，會導(dǎo)致流動不暢，壓力異常升高且不穩(wěn)。如果柱效明顯下降，伴隨峰形異常，要優(yōu)先懷疑柱子。

5. 檢測器流通池有氣泡

流通池內(nèi)有微小氣泡通過，會造成壓力波動和基線噪聲。通常觀察檢測器信號會更明顯。

6. 管路連接處微滲漏

特別是高壓部分的接頭，哪怕極微小的滲漏，也會導(dǎo)致壓力不穩(wěn)。有時滲漏很慢，肉眼看不到液滴，但壓力已經(jīng)受影響。

表1.HPLC壓力不穩(wěn)常見原因表

三、一步步排查，快速定位問題

第一步：簡化系統(tǒng)

卸下色譜柱，換上兩通（union）連接管路，觀察壓力。如果壓力平穩(wěn)，問題很可能在色譜柱；如果不穩(wěn)，問題在柱前系統(tǒng)（泵、進樣器、管路等）。

第二步：分段檢查

檢查流動相：是否新鮮配制、充分脫氣？換個新配的流動相試試。

檢查溶劑瓶：液位是否足夠？吸濾頭是否堵塞？輸液管里有沒有連續(xù)的氣泡？

檢查泵：運行每個泵單獨purge，聽聲音是否正常，觀察出口液流是否連續(xù)。如果有條件，可以測試每個泵的流量準確性。

檢查進樣器：多次進樣空白，觀察壓力波動是否與進樣動作相關(guān)。

檢查管路接頭：用紙巾仔細擦拭每個接頭，看是否有濕潤痕跡。

第三步：關(guān)注細節(jié)

室溫是否穩(wěn)定？溫度波動大會影響流動相粘度，進而影響壓力。

近是否更換過流動相？不同溶劑的粘度、可壓縮性不同，壓力會有變化，這可能是正常的。

儀器是否長時間未用？可能是密封圈干縮導(dǎo)致微滲漏。

表2.HPLC壓力不穩(wěn)系統(tǒng)排查步驟表

四、針對性解決辦法

對氣泡問題：

充分脫氣：超聲、抽濾、通惰性氣體（如氦氣），并用好在線脫氣機。

保持溶劑瓶液位，及時添加。

適當提高系統(tǒng)壓力（如加個背壓管），減少氣泡形成。

對泵問題：

清洗單向閥：拆下用異丙醇超聲清洗，或者用專用工具沖洗。

更換密封圈：這是常規(guī)耗材，按使用時長定期更換。

聯(lián)系工程師：如果是比例閥、混合器或泵頭其他問題，可能需要專業(yè)維修。

對進樣器問題：

清洗或更換進樣針、針座。

更換轉(zhuǎn)子密封圈（通常建議定期更換）。

對色譜柱問題：

嘗試反向沖洗柱子（注意柱子是否允許）。

更換柱頭篩板或修剪柱頭（有一定風(fēng)險，需謹慎）。

如果柱效嚴重下降，考慮更換新柱。

對漏液問題：

重新擰緊接頭（不要過度用力，以免損壞）。

更換損壞的管路、接頭或密封件。

五、養(yǎng)成良好的習(xí)慣，預(yù)防為主

流動相要干凈：用HPLC級溶劑，水要用超純水，流動相過濾、脫氣不能省。

儀器要愛惜：避免突然的壓力變化，更換流動相時要緩和過渡。

耗材定期換：密封圈、針座、濾頭等，按廠家建議或?qū)嶋H使用情況定期更換。

柱子好好用：樣品要干凈，用保護柱，避免突然的高流速沖擊。

用完好好收：長時間不用，要按規(guī)程清洗、保存系統(tǒng)。

表3.HPLC壓力不穩(wěn)預(yù)防措施表

液相色譜壓力不穩(wěn)是個“綜合征”，可能原因很多，但只要有條理地排查，大多數(shù)問題都能解決。平時多觀察儀器狀態(tài)，做個實驗記錄，時間長了，你一聽聲音、一看曲線，大概就能猜到問題在哪。實驗不易，且做且珍惜。希望這些經(jīng)驗?zāi)軒湍闵僮唿c彎路，實驗順利，數(shù)據(jù)漂亮！

常見問題(FAQ)

Q1：壓力波動總是發(fā)生在實驗開始后半小時左右，可能是什么原因？

這個問題很可能與溫度平衡有關(guān)。實驗室環(huán)境溫度或柱溫箱溫度未充分穩(wěn)定時，流動相和色譜柱的溫度會持續(xù)變化，導(dǎo)致粘度變化，從而引起壓力漂移或波動。特別是使用乙腈-水體系時，混合過程會吸熱，溫度影響更明顯。

解決辦法：

實驗前，提前打開柱溫箱，讓色譜柱在設(shè)定溫度下平衡至少30分鐘。同時，讓流動相以較小流速（如0.2-0.5 mL/min）在系統(tǒng)中循環(huán)10-15分鐘，使整個流路溫度達到平衡，再進行正式分析。此外，檢查實驗室空調(diào)出風(fēng)口是否直接對著儀器，避免局部溫度波動。

Q2：壓力突然降到零，然后又恢復(fù)正常，偶爾發(fā)生，怎么回事？

這種“斷崖式”下跌然后恢復(fù)，常見的原因是泵頭或管路中存有微小氣泡。氣泡進入高壓泵頭后，在壓縮瞬間無法形成有效壓力，導(dǎo)致壓力驟降；當氣泡被排出后，壓力又恢復(fù)正常。也可能與單向閥閥球偶爾卡住有關(guān)。

解決辦法：

首先，對流動相進行充分脫氣，并確保溶劑瓶吸濾頭完全浸入液面下，無氣泡吸入。其次，以較高流速（如3-5 mL/min）進行泵的Purge操作（不接色譜柱），持續(xù)5-10分鐘，可有效排出泵頭內(nèi)的殘留氣泡。如果問題仍偶爾出現(xiàn)，可嘗試用異丙醇低流速沖洗系統(tǒng)，或?qū)蜗蜷y進行清洗。

Q3：換了一根新色譜柱后壓力變得不穩(wěn)，而舊柱子沒問題，是柱子壞了嗎？

不一定。這種情況很可能是新色譜柱與系統(tǒng)連接處存在死體積或微滲漏。新柱子的接口螺帽或卡套可能因公差或安裝手法問題，未能與系統(tǒng)管路形成完美的零死體積連接，導(dǎo)致微小空隙，引起壓力波動和譜峰展寬。

解決辦法：

首先，重新安裝色譜柱：將柱子入口端接頭小心擰開，剪掉管路前端一小截（確保切口平整），按照正確手法（先手動旋緊，再用扳手旋轉(zhuǎn)1/4-1/2圈）重新擰緊。然后，用兩通代替柱子連接系統(tǒng)，觀察壓力是否平穩(wěn)，以確認問題是否在柱子接口。如果重新安裝后問題依舊，再聯(lián)系供應(yīng)商排查柱子本身的可能性（如柱床填充問題）。

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