人工牛黃是由牛膽粉、膽酸、豬去氧膽酸、?；撬帷⒛懠t素等多種成分配制而成的中藥原料，具有清熱解毒、化痰定驚之功效。膽酸類成分作為其主要活性物質(zhì)群，其含量是控制產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵指標。2025年版《中國藥典》對人工牛黃中多種膽酸類成分的含量測定采用高效液相色譜法（HPLC），因膽酸類物質(zhì)缺乏強紫外吸收，要求使用蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD），并規(guī)定了嚴格的系統(tǒng)適用性要求與含量限度。

本文對2025年版《中國藥典》中人工牛黃膽酸類成分的含量HPLC測定方法在色譜條件、系統(tǒng)適用性要求及含量限度規(guī)定等方面進行解讀。同時，基于藥典標準方法，采用配備D3270 ELSD檢測器的依利特EClassical 3200 HPLC系統(tǒng)，使用依利特SinoPak C18色譜柱，對人工牛黃膽酸類系統(tǒng)適用性溶液與對照品混合溶液進行分析。

1、2025版藥典方法解析

根據(jù)2025版《中國藥典》“人工牛黃”質(zhì)量標準，膽酸類含量HPLC測定方法要求通過一次進樣，實現(xiàn)對人工牛黃中6種主要結(jié)合型與游離型膽酸類成分的同時分離與定量，方法專屬性強，效率高。其核心要點如下：

色譜條件

色譜柱： 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（C18色譜柱）。

流動相： A，乙腈；B，0.2%三氟乙酸水溶液；

梯度，0-30 min，25%-52%A；30-45 min，52%A。

檢測器：ELSD。

流速： 1.0 mL/min。

系統(tǒng)適用性要求理論板數(shù)按?；悄懰岱逵嫴坏陀?0000。

?；悄懰崤c?；秦i去氧膽酸的分離度應大于2.0。

鵝去氧膽酸與去氧膽酸的分離度應大于1.5。

測定成分與含量限度（按干燥品計）

?；悄懰幔?.0% ~ 8.0%

甘氨膽酸：不少于2.5%

?；悄懰?、?；侨パ跄懰?、甘氨膽酸及甘氨去氧膽酸總量：不少于9.0%

豬去氧膽酸：不少于9.0%

膽酸：4.5% ~ 7.5%。

2、基于依利特EClassical 3200 HPLC系統(tǒng)的應用驗證

為驗證藥典方法的可操作性及色譜系統(tǒng)的適用性，使用配備D3270 ELSD檢測器的EClassical 3200 HPLC系統(tǒng)和SinoPak C18（5 μm，4.6×250 mm，貨號31110109）色譜柱進行測試。

系統(tǒng)適用性溶液測試

圖1顯示了人工牛黃膽酸類系統(tǒng)適用性溶液在SinoPak C18色譜柱上的分離色譜圖。圖中四個色譜峰（依次為?；秦i去氧膽酸、?；悄懰徕c、鵝去氧膽酸、脫氧膽酸）基線分離良好，峰形尖銳對稱，直觀表明該色譜系統(tǒng)對這幾類結(jié)構(gòu)相似的化合物具有優(yōu)異的分離能力。圖3為系統(tǒng)適用性溶液及對應單標在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖，進一步證實了系統(tǒng)適用性溶液與對照品溶液中對應峰的一致性。

圖1. 系統(tǒng)適用性溶液在SinoPak C18色譜柱上分離的色譜圖

色譜峰，1-牛磺豬去氧膽酸，2-?；悄懰徕c，3-鵝去氧膽酸，4-脫氧膽酸

圖2. 系統(tǒng)適用性溶液及對應單標在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖

表1中的數(shù)據(jù)進一步驗證了該系統(tǒng)的合規(guī)性。各組分的理論塔板數(shù)均遠高于藥典不低于10000的要求；牛磺膽酸與?；秦i去氧膽酸的分離度為2.55，鵝去氧膽酸與脫氧膽酸的分離度為6.13，均滿足藥典規(guī)定的分離度分別大于2.0和1.5的要求。這些結(jié)果證明，所用色譜系統(tǒng)完全符合2025版藥典方法對系統(tǒng)適用性的要求，能夠確保后續(xù)含量測定的準確性與可靠性。

表1. 系統(tǒng)適用性溶液色譜峰參數(shù)表

牛黃中6種主要成分對照品溶液測試

圖3為人工牛黃中六種關(guān)鍵膽酸對照品溶液在SinoPak C18色譜柱上的分離色譜圖，直觀驗證了方法的分離效能。圖中，?；悄懰徕c、甘氨膽酸、?；侨パ跄懰?、膽酸、豬去氧膽酸及甘氨去氧膽酸依次實現(xiàn)基線分離，峰形尖銳對稱。圖4為對照品溶液及對應單標在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖，進一步證實了各組分峰對應的一致性。

圖3. 牛黃中6種主要成分對照品溶液在SinoPak C18色譜柱上的分離色譜圖色譜峰，1-?；悄懰徕c，

2-甘氨膽酸，3-?；侨パ跄懰?，4-膽酸，5-豬去氧膽酸，6-甘氨去氧膽酸

圖4. 牛黃中6種主要成分對照品溶液在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖

表2中的數(shù)據(jù)進一步驗證了該系統(tǒng)的合規(guī)性。各成分的理論塔板數(shù)極高（例如膽酸峰超過200,000），分離度充分（如膽酸與豬去氧膽酸間分離度預計大于8.0），且拖尾因子優(yōu)異（接近1.0）。這些數(shù)據(jù)表明所用色譜系統(tǒng)完全滿足藥典要求，具備高柱效、強分離能力和良好的峰形，為確保6種成分準確定量提供了可靠的方法學基礎(chǔ)。

表2. 牛黃中6種主要成分對照品溶液色譜峰參數(shù)表

3、總結(jié)

2025版《中國藥典》采用HPLC-ELSD法測定人工牛黃中多種膽酸類成分，方法科學、嚴謹。本文的驗證實驗表明，依利特EClassical 3200系統(tǒng)結(jié)合SinoPak C18色譜柱能夠完美復現(xiàn)該方法，為藥品檢驗機構(gòu)、制藥企業(yè)及相關(guān)研發(fā)單位提供了經(jīng)過驗證的、可行的儀器配置與操作方案，有助于保障人工牛黃及其制劑的質(zhì)量穩(wěn)定與有效。