高效液相色譜儀，作為實(shí)驗(yàn)室里高效又精密的 “分離分析能手”，早已深度融入教學(xué)科研、制藥研發(fā)、環(huán)保檢測(cè)、食品質(zhì)控、化工分析等多個(gè)領(lǐng)域。無(wú)論是剛接觸儀器的新手，還是需要規(guī)范操作流程的資深實(shí)驗(yàn)人員，掌握一套標(biāo)準(zhǔn)、細(xì)致的操作方法都至關(guān)重要 —— 這不僅能讓實(shí)驗(yàn)結(jié)果更精準(zhǔn)，更能守護(hù)儀器長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行，延長(zhǎng)它的 “工作壽命”。今天，我們就從操作前準(zhǔn)備到關(guān)機(jī)維護(hù)，一步步拆解高效液相色譜儀的完整使用流程。?

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操作前準(zhǔn)備：做好 “戰(zhàn)前” 準(zhǔn)備，實(shí)驗(yàn)更順暢?

流動(dòng)相的配制是實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響后續(xù)分析結(jié)果。按照實(shí)驗(yàn)方案要求，我們需要配制甲醇與水比例為 8:2 的混合流動(dòng)相，同時(shí)準(zhǔn)備好純甲醇；配制完成后，記得用濾膜仔細(xì)過(guò)濾，再進(jìn)行超聲脫氣處理，這樣才能避免雜質(zhì)和氣泡影響后續(xù)檢測(cè)，處理好的流動(dòng)相就可以備用了。?

開(kāi)機(jī)與平衡系統(tǒng)：耐心調(diào)試，為檢測(cè)打基礎(chǔ)?

先打開(kāi)泵的電源，一定要確認(rèn)壓力上限設(shè)置為 40MPa，這是保障儀器安全運(yùn)行的關(guān)鍵參數(shù)。?

接著，把泵的過(guò)濾頭放入純甲醇中，將流量設(shè)定為 1ml/min，啟動(dòng)泵開(kāi)始沖洗，這個(gè)過(guò)程需要持續(xù) 10-20 分鐘，目的是清潔管路，排出殘留雜質(zhì)；沖洗完成后，將過(guò)濾頭切換到之前準(zhǔn)備好的甲醇水流動(dòng)相中，讓泵繼續(xù)運(yùn)行，讓系統(tǒng)逐漸適應(yīng)流動(dòng)相。?

隨后打開(kāi)檢測(cè)器電源，把檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)定為 280nm，完成調(diào)零操作，確保檢測(cè)器處于穩(wěn)定的初始狀態(tài)。

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工作站連接與基線穩(wěn)定：確認(rèn) “信號(hào)通暢”，等待佳狀態(tài)?

啟動(dòng) UC-3268 色譜工作站后，留意界面是否出現(xiàn)握手圖標(biāo) —— 這個(gè)圖標(biāo)意味著工作站與儀器連接成功，信號(hào)傳輸正常。接下來(lái)就是耐心觀察基線走勢(shì)，只有當(dāng)基線變得平穩(wěn)，沒(méi)有明顯波動(dòng)時(shí)，才說(shuō)明系統(tǒng)已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，可以開(kāi)始進(jìn)樣了。?

樣品分析操作：精準(zhǔn)操作，捕捉每一個(gè)色譜峰?

進(jìn)樣前先再確認(rèn)一下基線位置，如果發(fā)現(xiàn)基線有偏移，必要時(shí)重新進(jìn)行調(diào)零，保證檢測(cè)起點(diǎn)準(zhǔn)確。?

將進(jìn)樣閥輕輕扳至 “LOAD” 位置，緩慢注入標(biāo)樣；標(biāo)樣注入后，要迅速將進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)至 “INJECT” 位置，避免樣品泄漏或停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)影響結(jié)果。?

此時(shí)工作站會(huì)自動(dòng)開(kāi)始采集數(shù)據(jù)，我們只需靜靜等待，直到色譜峰完整地出現(xiàn)在界面上，再點(diǎn)擊停止采集即可。?

建立校正曲線：規(guī)范參數(shù)，讓定量更準(zhǔn)確?

首先設(shè)置定量參數(shù)：選擇峰面積定量法，搭配外標(biāo)法，采用 1 點(diǎn)校正的方式，這些參數(shù)的選擇要貼合實(shí)驗(yàn)的定量需求。?

然后填寫組份表：比如分析辣椒素時(shí)，要準(zhǔn)確輸入組分名稱 “辣椒素”、對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間 5.2 分鐘，以及標(biāo)準(zhǔn)濃度 100%，每一項(xiàng)信息都不能出錯(cuò)，否則會(huì)影響校正結(jié)果。?

后定義校正曲線：找到對(duì)應(yīng)的譜圖文件，進(jìn)行重校正操作，系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，這條曲線將作為后續(xù)樣品定量分析的重要依據(jù)。?

樣品檢測(cè)與數(shù)據(jù)分析：批量檢測(cè)也能高效精準(zhǔn)?

對(duì)待測(cè)樣品，重復(fù)之前的進(jìn)樣步驟即可：注入樣品后，等待完整的色譜峰采集完成，點(diǎn)擊停止；想要查看分析結(jié)果很簡(jiǎn)單，直接點(diǎn)擊屏幕上的 “報(bào)告” 按鈕，各項(xiàng)檢測(cè)數(shù)據(jù)就能清晰呈現(xiàn)。如果需要檢測(cè)多個(gè)樣品，不用重復(fù)復(fù)雜設(shè)置，只要一次次規(guī)范完成進(jìn)樣操作就行。?

歷史數(shù)據(jù)查詢：隨時(shí)回溯，數(shù)據(jù)管理更便捷?

如果需要查看之前的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)入工作站的 “再處理” 界面，找到并打開(kāi)需要的歷史數(shù)據(jù)文件，點(diǎn)擊 “重新計(jì)算”，完整的屏幕報(bào)告就會(huì)立刻顯示，方便我們追溯實(shí)驗(yàn)過(guò)程、核對(duì)數(shù)據(jù)結(jié)果。

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規(guī)范關(guān)機(jī)流程：細(xì)致收尾，守護(hù)儀器 “健康”?

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，關(guān)機(jī)步驟同樣不能馬虎。先關(guān)閉檢測(cè)器電源，再停止泵的運(yùn)行；之后，用純甲醇繼續(xù)沖洗系統(tǒng) 10-20 分鐘，徹底清潔管路內(nèi)殘留的流動(dòng)相；待系統(tǒng)壓力穩(wěn)定后，再關(guān)閉泵的電源；后，用純甲醇或純凈水仔細(xì)清洗進(jìn)樣閥，為下次使用做好準(zhǔn)備。?

表1.操作全流程關(guān)鍵信息表

注意事項(xiàng)：這些細(xì)節(jié)，決定實(shí)驗(yàn)與儀器的 “壽命”?

1、每次實(shí)驗(yàn)前，務(wù)必確認(rèn)流動(dòng)相已經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣處理，這是避免管路堵塞、保證檢測(cè)準(zhǔn)確的基礎(chǔ)；?

2、操作儀器時(shí)，嚴(yán)格按照 40MPa 的壓力上限運(yùn)行，不要超壓操作，防止損壞泵體和管路；?

3、定期更換流動(dòng)相，保持系統(tǒng)內(nèi)部清潔，避免殘留物質(zhì)堆積影響儀器性能；?

4、每次使用儀器后，及時(shí)記錄使用情況，建立完整的儀器使用檔案，方便后續(xù)維護(hù)和問(wèn)題追溯。?

表2.儀器操作注意事項(xiàng)對(duì)照表

表3.不同操作階段常見(jiàn)問(wèn)題與解決方法表?

掌握這套標(biāo)準(zhǔn)操作流程，不僅能讓你充分發(fā)揮高效液相色譜儀的分析性能，拿到準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，更能通過(guò)規(guī)范操作延長(zhǎng)儀器的使用壽命。要知道，儀器的長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行，離不開(kāi)每一次細(xì)致的操作和用心的維護(hù)。

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