高效液相色譜儀進(jìn)樣操作全攻略：手把手教你做對(duì)每一步，數(shù)據(jù)精準(zhǔn)無(wú)誤

做高效液相色譜（HPLC）分析，結(jié)果忽高忽低、峰形難看、壓力不穩(wěn)？問(wèn)題大概率出在進(jìn)樣這個(gè)核心環(huán)節(jié)。進(jìn)樣操作看似簡(jiǎn)單，卻是影響數(shù)據(jù)精度、儀器壽命的關(guān)鍵，一個(gè)細(xì)節(jié)疏漏就可能導(dǎo)致整批實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)作廢，甚至損傷昂貴的色譜柱。

今天為大家整理一份保姆級(jí)HPLC進(jìn)樣操作流程、核心避坑要點(diǎn)及故障速查方案，手把手教你規(guī)范操作，避開(kāi)常見(jiàn)失誤，確保每次進(jìn)樣精準(zhǔn)、可靠，數(shù)據(jù)零偏差！

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第一部分：標(biāo)準(zhǔn)操作流程——照做零失誤，步步有章法

第一步：上機(jī)前萬(wàn)全準(zhǔn)備，筑牢實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)（重中之重）

1.樣品預(yù)處理：樣品需完全溶解無(wú)沉淀，必須用0.22 μm（反相柱）/0.45 μm（正相柱）HPLC專(zhuān)用濾膜真空過(guò)濾，杜絕顆粒雜質(zhì)，這是保護(hù)色譜柱和流路的鐵律，缺一不可。

2.樣品瓶規(guī)范：使用潔凈的液相專(zhuān)用螺紋樣品瓶，樣品液位控制在瓶身1/2-2/3處（液位過(guò)低易吸空、過(guò)高易漏液污染），配套瓶蓋+進(jìn)樣墊擰緊密封，一瓶一蓋一墊，嚴(yán)禁混用；放入樣品盤(pán)時(shí)核對(duì)位置，瓶簽朝外，避免錯(cuò)樣、漏樣。

3. 儀器狀態(tài)核查：確認(rèn)流動(dòng)相足量、脫氣徹底、管路無(wú)氣泡，系統(tǒng)壓力穩(wěn)定、基線平直（基線噪聲≤0.1mV，漂移≤0.5mV/h），柱溫箱達(dá)到設(shè)定溫度，儀器進(jìn)入就緒狀態(tài)。

第二步：上機(jī)精準(zhǔn)操作，細(xì)節(jié)把控精度

1. 方法參數(shù)設(shè)置：在工作站中準(zhǔn)確錄入進(jìn)樣體積、洗針次數(shù)/時(shí)間、洗針溶劑、柱溫、流速等參數(shù)；常規(guī)定量分析，進(jìn)樣體積建議控制在定量環(huán)容量的50%以內(nèi)（如20μL定量環(huán)，進(jìn)樣≤10μL），大化保證進(jìn)樣重復(fù)性。

2. 樣品序列建立：清晰錄入樣品編號(hào)、樣品盤(pán)位置、樣品名稱(chēng)，數(shù)據(jù)文件命名遵循「日期-項(xiàng)目-樣品號(hào)」規(guī)范，便于后期溯源、數(shù)據(jù)整理，避免文件混亂。

3. 后隱患排查：檢查廢液瓶液位（≤80%），防止廢液倒吸污染流路；確認(rèn)進(jìn)樣器門(mén)關(guān)閉到位，無(wú)松動(dòng)。

4. 啟動(dòng)運(yùn)行監(jiān)測(cè)：點(diǎn)擊序列開(kāi)始，觀察首次進(jìn)樣時(shí)系統(tǒng)壓力的短暫波動(dòng)、基線的正常抬升，這是樣品成功注入的直觀訊號(hào)；若壓力無(wú)變化、基線無(wú)響應(yīng)，立即停止運(yùn)行排查問(wèn)題。

第三步：實(shí)驗(yàn)后收尾維護(hù)，延長(zhǎng)儀器壽命

1.進(jìn)樣針保養(yǎng)：序列結(jié)束后，將進(jìn)樣針置于90%水+10%甲醇混合清洗液中，執(zhí)行自動(dòng)洗針程序（洗針3-5次），避免針內(nèi)殘留樣品結(jié)晶。

2. 流路專(zhuān)項(xiàng)清洗：若分析高鹽、高粘度、強(qiáng)極性樣品，需用純水（或低鹽緩沖液）沖洗進(jìn)樣閥及流路10-15min，再用甲醇/乙腈沖洗，防止鹽結(jié)晶、殘留物堵塞管路和定量環(huán)。

3. 數(shù)據(jù)與耗材整理：及時(shí)備份實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)至專(zhuān)用硬盤(pán)，避免數(shù)據(jù)丟失；取出樣品盤(pán)內(nèi)剩余樣品瓶，清洗晾干備用，清理進(jìn)樣器周邊殘留溶劑。

第二部分：四大核心避坑要點(diǎn)——遠(yuǎn)離雷區(qū)，數(shù)據(jù)+儀器雙保障

核心1：杜絕交叉污染——數(shù)據(jù)純凈度的生命線

1.禁忌：高濃度樣品后直接進(jìn)低濃度樣品、瓶蓋/進(jìn)樣墊混用、洗針不徹底

2.規(guī)范：① 高濃度樣品/標(biāo)樣分析后，增加洗針次數(shù)（5-8次）+延長(zhǎng)洗針時(shí)間，洗針溶劑選用「強(qiáng)洗脫能力溶劑」（如純甲醇、乙腈，或甲醇-水混合液）；② 瓶蓋內(nèi)墊是交叉污染高發(fā)區(qū)，必須專(zhuān)蓋專(zhuān)用，污染后立即更換；③ 樣品瓶使用前用甲醇超聲清洗，晾干后再裝樣。

核心2：確保進(jìn)樣精準(zhǔn)——結(jié)果重復(fù)性的核心

1.禁忌：樣品液含氣泡、樣品溶劑與流動(dòng)相洗脫能力差異過(guò)大、定量環(huán)過(guò)載

2.規(guī)范：① 樣品過(guò)濾后短暫離心（3000r/min，5min），或用手指輕彈瓶壁，讓微小氣泡浮起排出，氣泡是進(jìn)樣精度的「隱形殺手」；② 規(guī)避溶劑效應(yīng)：樣品溶解溶劑優(yōu)先選用「流動(dòng)相初始比例溶液」，若樣品溶解性差，可適當(dāng)提高有機(jī)相比例（差值≤20%），防止峰形前延、分叉、拖尾；③ 嚴(yán)禁超定量環(huán)容量進(jìn)樣，避免定量不準(zhǔn)。

核心3：愛(ài)護(hù)核心部件——延長(zhǎng)儀器/色譜柱使用壽命

1.禁忌：樣品未過(guò)濾直接進(jìn)樣、忽視進(jìn)樣閥密封墊損耗、長(zhǎng)期不清洗定量環(huán)

2.規(guī)范：① 過(guò)濾是底線：未過(guò)濾的樣品顆粒是色譜柱堵塞、柱效下降的頭號(hào)元兇，哪怕樣品看似澄清，也必須過(guò)濾；② 關(guān)注進(jìn)樣閥密封墊：屬于易耗品，2000-5000次進(jìn)樣后及時(shí)更換，若出現(xiàn)壓力異常波動(dòng)、進(jìn)樣口滲漏，立即停機(jī)更換；③ 每月拆解清洗定量環(huán)1次，去除內(nèi)部殘留雜質(zhì)。

核心4：嚴(yán)守安全規(guī)范——保護(hù)自身+設(shè)備安全

1. 禁忌：系統(tǒng)帶壓操作進(jìn)樣器、無(wú)防護(hù)處理有毒樣品、溶劑廢液隨意傾倒

2. 規(guī)范：① 所有進(jìn)樣器拆卸、管路連接操作，必須先卸壓再進(jìn)行，嚴(yán)禁帶壓擰動(dòng)接頭、打開(kāi)進(jìn)樣器門(mén)，防止溶劑噴濺、部件損壞；② 處理有毒、腐蝕性、揮發(fā)性樣品時(shí)，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作，佩戴丁腈手套、護(hù)目鏡、實(shí)驗(yàn)服；③ 廢液分類(lèi)收集，交由專(zhuān)業(yè)機(jī)構(gòu)處理，嚴(yán)禁直接排放。

第三部分：常見(jiàn)問(wèn)題速查表——秒判原因，快速解決，不求人

規(guī)范進(jìn)樣，讓HPLC分析事半功倍

高效液相色譜分析，七分操作，三分儀器，而進(jìn)樣操作正是整個(gè)實(shí)驗(yàn)的「咽喉環(huán)節(jié)」。將標(biāo)準(zhǔn)化流程內(nèi)化為操作習(xí)慣，把避坑要點(diǎn)牢記于心，不僅能獲得峰形對(duì)稱(chēng)、數(shù)據(jù)精準(zhǔn)、重復(fù)性優(yōu)異的實(shí)驗(yàn)圖譜，更能大幅減少儀器故障，延長(zhǎng)色譜柱、進(jìn)樣閥等核心部件的使用壽命，提升實(shí)驗(yàn)效率。

細(xì)節(jié)決定成敗，從每一次規(guī)范進(jìn)樣做起，讓你的HPLC分析工作告別數(shù)據(jù)異常、儀器故障，全程得心應(yīng)手！

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