HPLC儀器驗(yàn)證是一個(gè)系統(tǒng)性的過(guò)程，遵循生命周期概念，包括設(shè)計(jì)確認(rèn)、安裝確認(rèn)、運(yùn)行確認(rèn)和性能確認(rèn)四個(gè)階段。

一、驗(yàn)證的法規(guī)依據(jù)與目的

目的：

確保儀器從安裝到整個(gè)生命周期內(nèi)都能持續(xù)穩(wěn)定運(yùn)行，產(chǎn)生可靠、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

滿足藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范、實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范等法規(guī)要求。

降低因儀器問(wèn)題導(dǎo)致的分析失敗、產(chǎn)品召回或合規(guī)風(fēng)險(xiǎn)。

主要法規(guī)/指南：

USP通則：特別是 <1058> 分析儀器確認(rèn)，將HPLC歸類為B級(jí)儀器，需要進(jìn)行完整的IQ/OQ/PQ。

GMP/GLP：藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范/藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范。

ICH Q2(R1)：分析方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則（雖然主要針對(duì)方法，但PQ與其緊密相關(guān)）。

表1.HPLC儀器驗(yàn)證核心法規(guī)與目的表

相關(guān)產(chǎn)品推薦：1、高效液相色譜儀  2、超高效液相色譜儀  3、制備液相色譜儀  4、專用液相色譜儀

二、驗(yàn)證的四個(gè)階段

以下是針對(duì)HPLC儀器的四個(gè)驗(yàn)證階段的詳細(xì)說(shuō)明：

1. 設(shè)計(jì)確認(rèn)

定義：在采購(gòu)儀器前，確認(rèn)儀器的設(shè)計(jì)規(guī)格和功能能夠滿足用戶的需求和預(yù)期的分析任務(wù)。

主要內(nèi)容：

明確分析需求（如靈敏度、精度、流速范圍等）。

評(píng)估不同供應(yīng)商的儀器規(guī)格書(shū)（泵的精度、檢測(cè)器的線性范圍和噪音、自動(dòng)進(jìn)樣器的交叉污染等）。

確認(rèn)供應(yīng)商的資質(zhì)和售后服務(wù)。

形成用戶需求說(shuō)明文件。

輸出：用戶需求說(shuō)明、供應(yīng)商評(píng)估報(bào)告、采購(gòu)訂單（包含技術(shù)規(guī)格）。

2. 安裝確認(rèn)

定義：確認(rèn)儀器已按照制造商的規(guī)格正確交付、安裝，并且安裝環(huán)境符合要求。

主要內(nèi)容：

到貨檢查：核對(duì)裝箱單，確認(rèn)所有組件（泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測(cè)器、工作站軟件、備件等）齊全且無(wú)損壞。

安裝環(huán)境：檢查電源、接地、環(huán)境溫度/濕度、實(shí)驗(yàn)臺(tái)穩(wěn)固性、排風(fēng)等是否符合要求。

文件檢查：收集并歸檔所有必需文件，如操作手冊(cè)、軟件備份、安裝圖紙、合格證等。

軟件確認(rèn)：記錄工作站的軟件版本，確認(rèn)其已正確安裝并授權(quán)。

連接檢查：確認(rèn)各模塊之間連接正確，管路無(wú)泄漏。

輸出：IQ檢查清單、相關(guān)文件歸檔記錄。

3. 運(yùn)行確認(rèn)

定義：確認(rèn)儀器的各項(xiàng)功能在指定的操作范圍內(nèi)能按照制造商的設(shè)計(jì)正常運(yùn)行。

主要內(nèi)容（使用標(biāo)準(zhǔn)品或特定工具進(jìn)行測(cè)試）：

輸液泵：

流速準(zhǔn)確性：在不同流速下（如0.5, 1.0, 2.0 mL/min）測(cè)量實(shí)際流速，與設(shè)定值比較。

流速精密度：在固定流速下，多次測(cè)量流速的RSD。

壓力脈動(dòng)和穩(wěn)定性：觀察壓力波動(dòng)情況。

自動(dòng)進(jìn)樣器：

進(jìn)樣準(zhǔn)確性：注入不同體積的標(biāo)準(zhǔn)品，考察峰面積的RSD。

進(jìn)樣精密度：多次注入同一體積標(biāo)準(zhǔn)品，考察峰面積的RSD。

攜帶污染：先注入高濃度樣品，緊接著注入空白溶劑，檢查空白譜圖中是否有殘留峰。

柱溫箱：

溫度準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性：使用校準(zhǔn)過(guò)的溫度探頭測(cè)量柱溫箱內(nèi)實(shí)際溫度，與設(shè)定值比較，并考察其波動(dòng)范圍。

檢測(cè)器（以常用的UV/Vis檢測(cè)器為例）：

波長(zhǎng)準(zhǔn)確性：使用具有特征吸收峰的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如 holmium oxide 濾光片）驗(yàn)證實(shí)際波長(zhǎng)與顯示波長(zhǎng)是否一致。

噪音和漂移：在指定條件下（如254nm， 0 AUFS）運(yùn)行基線，測(cè)量短期噪音和長(zhǎng)期漂移。

線性范圍：注入一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，考察響應(yīng)值與濃度的線性關(guān)系（相關(guān)系數(shù)R2）。

系統(tǒng)整體：

梯度準(zhǔn)確性：通過(guò)特定測(cè)試（如低壓梯度或高壓梯度測(cè)試）驗(yàn)證梯度比例的實(shí)際值與設(shè)定值的一致性。

輸出：OQ測(cè)試方案和報(bào)告，包含所有原始數(shù)據(jù)和可接受標(biāo)準(zhǔn)。

4. 性能確認(rèn)

定義：在OQ完成后，使用與未來(lái)實(shí)際分析方法相似的條件，模擬實(shí)際分析過(guò)程，證明整個(gè)系統(tǒng)在特定實(shí)驗(yàn)條件下持續(xù)符合預(yù)定的性能標(biāo)準(zhǔn)。

主要內(nèi)容：

配制一個(gè)系統(tǒng)適用性測(cè)試溶液，該溶液通常包含待測(cè)物和幾個(gè)已知雜質(zhì)，或一個(gè)特定的標(biāo)準(zhǔn)品混合物。

在常規(guī)分析條件下運(yùn)行該系統(tǒng)適用性測(cè)試溶液。

評(píng)估關(guān)鍵的系統(tǒng)適用性參數(shù)，這些參數(shù)通常直接引用自藥典或分析方法：

色譜柱柱效：計(jì)算理論塔板數(shù)。

分離度：考察關(guān)鍵峰對(duì)之間的分離度。

拖尾因子：檢查主峰的對(duì)稱性。

保留時(shí)間的重復(fù)性：多次進(jìn)樣，考察保留時(shí)間的RSD。

峰面積的重復(fù)性：多次進(jìn)樣，考察峰面積的RSD。

關(guān)鍵點(diǎn)：PQ不是一次性的，應(yīng)在每次重大維修、關(guān)鍵部件更換后重新執(zhí)行，并建議定期（如每季度或每半年） 進(jìn)行，作為持續(xù)驗(yàn)證的一部分。

輸出：PQ測(cè)試方案和報(bào)告，包含色譜圖和系統(tǒng)適用性計(jì)算結(jié)果。

表2.HPLC驗(yàn)證四階段核心信息表

表3.OQ階段各模塊測(cè)試項(xiàng)目表

三、驗(yàn)證周期與再驗(yàn)證

在以下情況下，需要進(jìn)行再驗(yàn)證：

定期再驗(yàn)證：根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果，制定定期PQ計(jì)劃（如每6個(gè)月或12個(gè)月）。

儀器移動(dòng)或搬遷后。

重大維修或關(guān)鍵部件更換后（如更換泵頭、檢測(cè)器流通池、升級(jí)主板等）。

出現(xiàn)系統(tǒng)性故障，懷疑儀器性能時(shí)。

表4.再驗(yàn)證觸發(fā)條件與周期表

HPLC驗(yàn)證是一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)?、有文件記錄的科學(xué)過(guò)程。它確保了分析數(shù)據(jù)的ALCOA+ 原則（可歸因、清晰、同步、原始、準(zhǔn)確，外加完整、一致、持久、可用）。

高效液相色譜儀驗(yàn)證常見(jiàn)問(wèn)題

Q1: 儀器驗(yàn)證到底應(yīng)該由誰(shuí)來(lái)做？是儀器供應(yīng)商還是我們自己的實(shí)驗(yàn)室？

A: 通常是雙方協(xié)作的模式。

供應(yīng)商：通常負(fù)責(zé)提供標(biāo)準(zhǔn)的IQ/OQ服務(wù)（作為安裝服務(wù)的一部分），他們擁有專業(yè)的工具、標(biāo)準(zhǔn)品和協(xié)議，能高效完成基礎(chǔ)驗(yàn)證。

實(shí)驗(yàn)室/用戶：是驗(yàn)證的責(zé)任主體。你需要負(fù)責(zé)：

定義用戶需求。

審核并批準(zhǔn)供應(yīng)商提供的驗(yàn)證方案和報(bào)告。

執(zhí)行或參與PQ（性能確認(rèn)），因?yàn)镻Q需要模擬你的實(shí)際分析方法。

負(fù)責(zé)日常的持續(xù)驗(yàn)證和再驗(yàn)證。

關(guān)鍵：絕不能認(rèn)為“供應(yīng)商做完了，驗(yàn)證就結(jié)束了”。實(shí)驗(yàn)室必須掌握并理解整個(gè)驗(yàn)證過(guò)程和結(jié)果。

Q2: 驗(yàn)證的可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該怎么定？可以直接用廠家標(biāo)準(zhǔn)嗎？

A: 可以，但需經(jīng)過(guò)評(píng)估和批準(zhǔn)。

默認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)：在無(wú)特定法規(guī)或方法要求時(shí)，直接采用儀器廠家在OQ/PQ協(xié)議中提供的、基于儀器設(shè)計(jì)規(guī)格的標(biāo)準(zhǔn)是常見(jiàn)且可接受的。這些標(biāo)準(zhǔn)通常比法規(guī)要求更嚴(yán)格。

更嚴(yán)標(biāo)準(zhǔn)：如果您的分析方法對(duì)某項(xiàng)指標(biāo)有特殊要求（例如，方法要求極低的進(jìn)樣精度），您可能需要制定比廠家標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格的可接受標(biāo)準(zhǔn)。

法規(guī)引用：對(duì)于PQ，標(biāo)準(zhǔn)通常直接引用藥典（如USP、EP）或內(nèi)部方法中規(guī)定的系統(tǒng)適用性要求。

核心原則：所有標(biāo)準(zhǔn)必須在驗(yàn)證開(kāi)始前在方案中明確定義，并獲得批準(zhǔn)。

Q3: 多長(zhǎng)時(shí)間需要做一次再驗(yàn)證？PQ的頻率如何定？

A: 沒(méi)有“一刀切”的規(guī)定，應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

觸發(fā)式再驗(yàn)證：

儀器經(jīng)過(guò)重大維修或關(guān)鍵部件更換后（必須做）。

儀器搬遷后（必須做）。

數(shù)據(jù)出現(xiàn)系統(tǒng)性偏差，懷疑儀器性能時(shí)。

定期再驗(yàn)證：

通常建議每6個(gè)月或12個(gè)月進(jìn)行一次完整的PQ。

頻率取決于：儀器使用頻率、分析任務(wù)的關(guān)鍵程度、儀器的歷史性能穩(wěn)定性等。一臺(tái)每天高強(qiáng)度使用的QC儀器，其PQ頻率應(yīng)高于一臺(tái)偶爾使用的研究型儀器。